CELULAS LE

Fundamento

El lupus eritematoso diseminado es una enfermedad inflamatoria crónica del tejido conectivo que ocasiona cambios bioquímicos y estructurales en la piel, articulaciones y músculo, por lo general con ataque de múltiples órganos. A la postre puede causar la muerte por insuficiencia de órganos vitales especialmente los riñones.

En el lupus eritematoso se produce un anticuerpo de carácter antinuclear. Este anticuerpo puede atacar a los neutrófilos. La célula se rompe y queda en libertad el núcleo, convertido en una masa eosinofílica amorfa y de gran tamaño. Esta masa es fagocitada por otro neutrófilo el cual ocupa casi todo el espacio celular. La imagen que se presenta una vez hecha la tinción, es inconfundible y recibe el nombre de células LE. 

La técnica que se presenta a continuación intenta provocar el fenómeno celular LE in vitro, lo que favorece su producción machacando el coágulo a través de una fina malla. Sin embargo, ocasionalmente pueden presentarse las células LE en otra enfermedad en la que también se producen anticuerpos antinucleares, particularmente en las llamadas colagenopatías.

Finalidad

-  Facilitar el diagnóstico de LE.
- Evaluar el tratamiento de la enfermedad (en promedio 60% de    individuos  tratados satisfactoriamente no muestran células propias de lupus, esto después de 4 a 6 semanas de tratamiento)

Material
-    Sangre venosa tomada sin anticoagulante.
-    Incubadora.
-    Colador de malla fina.
-    Vaso de precipitado de 250 ml.
-    Mortero con mazo.
-    Pipeta Pasteur.
-    2 Tubos de Wintrobe.
-    Centrífuga.
-    Coloración de Wright o hemocolorante rápido.
-    Portaobjetos.

Procedimiento

1.    Una vez coagulada la sangre incúbela a 37°C por 2 horas o el tiempo necesario para que el coágulo se retraiga.
2.    Colocar la malla fina sobre el mortero, verter el contenido del tubo previamente incubado sobre la malla y con el mazo machacar el coágulo, recogiendo el colado en el mortero.
3.    Con la pipeta Pasteur recoger el colado y llenar los tubos de Wintrobe tratando que ambos queden bien calibrados. Centrifugar por 5 ó 15 minutos.
4.    Tomar del tubo de Wintrobe la capa de leucocitos y hacer una extensión sobre un portaobjetos, ayudándose con otro.
5.    Teñir con la coloración de Wright o con hemocolorante rápido.
6.    Revisar la preparación con el objetivo de inmersión.

Interpretación de los resultados
-    Reporta como positivo s e se observan dos o más células LE.
-    Reporta como negativo si no se observan dichas células.

Nota: Esta prueba se confirma con otros estudios como la presencia de anticuerpos antinucleares ANAs o anticuerpos contra ADN.

Factores que interfieren en los resultados

-   Hemólisis.
-   Fármacos como la Isoniacida pueden dar falsos positivos.
-  Algunos pacientes con artritis reumatoidea, con esclerodermia y con sensibilidad a los medicamentos también muestran un examen de células de lupus eritematoso positivo.

Referencias
- McKenzie, Shirlyn B. Cuenta de reticulocitos. México; El manual moderno; 2000. Hematología clínica; p. 554-55

- MedlinePlus Enciclopedia Médica. 2005. Hematología: Examen de células de lupus eritematoso. Estados Unidos. [web en línea]. Disponible desde Internet enhttp://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003635.htm[con acceso el 6 de Diciembre de 2006]

- MedlinePlus Enciclopedia Médica. 2005. Hematología: Lupus eritematoso sistémico. Estados Unidos. [web en línea]. Disponible desde Internet enhttp://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000435.htm[con acceso el 6 de Diciembre de 2006]

                                                             FENOME DE CELULA LE.

Imágenes sobre las diferentes células periféricas de la sangre, se observan las características que nos ayuda a reconocer las células, de muy buena ayuda 

MEMBRANA PLASMATICA

http://es.slideshare.net/marleniriveracastromonte/membrana-plasmatica-37663541

Coloracion GRAM.

La coloración o tincion Gram es un tipo de tincion diferencial, la cual se usa mucho en la bacteriología.Esta tecnica fue desarrollada por Cristhian Gram.

Gracias a la propiedades y características de la la pared celular delas bacterias, estas se van a poder diferenciar en dos grandes grupos  con la ayuda de la coloración Gram , siendo en Gram + y Gram - .

 Protocolo :

1 Realizar un extendido de la muestra a colorear en un porta objeto

2 Fijar el extendido a el portaobjeto con la ayuda de un mechero o dejarlo secar 

3 Agrgar Cristal violeta sobre el extendido ( colorante )

4 Retirar el cristal violeta y agregar lugol (mordiente)

5 Rettir lugar y agregar alcohol acetona  ( decolorante)

6 Lavar con agua destilada

7 Agregar safranina ( contrastes)

NOTA : 

Antes de realizar la coloracion Gram, que los colorantes no se encuentren precipitados ni vencidos

Los tiempo se tendrán en cuenta con los reactivos que se trabaje.

 

  Fundamento :  

Una vez estando fijadala muestra en el portaobjeto, se le agregara el Cristal Violeta, el cual teñira todas las células procariotas, con la ayuda del lugol (mordiente) se formara un complejo CV-lugol el cual solo se quedara unido en la pared bacteriana de las Gram + (Peptidoglicano) mas no en las Gram - ya que ella presentan membrana externa, luego con la ayuda del decolorante,alcohol acetona, se podrá eliminar el exceso de CV mas no el complejo CV-Yodo, en cual se formo en las Gram+ , por ultimo paso es la agregacion de safranina, la cual servirá como colorante de contrastete, ya que este colorante teñira aquellas celulas que no han podido formar el complejo CV-Yodo, llamandose a estas Gram -.

despues de haber realizado la coloracion, se podra observar la muestra coloreada a miscroscopio optico a 1000x para asi poder diferenciar las bacterias Gram + y Gram  - 

UNIONES CELULARES

Poder entender la función de las coenzimas ( NAD) en la oxidación de los sustratos es muy interesante, y esta imagen nos ilustra la reducción del NAD a NADH mediada por una desidrogenasa 

LIPIDOS..... de mucha ayuda

http://es.scribd.com/doc/235592556/lipidos